多肽合成-多肽定制

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多肽问答

TAT peptide 序列为Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (RKKRRORRR)可以携带多肽穿膜。

环肽包括Cys-Cys之间形成的硫硫键(S-S),即氧化肽,可以提供一对S-S,二对S-S,三对S-S的多肽合成,也可以提供多肽分子间的氧化,包括同一条多肽间形成二聚体,二条不同多肽间的氧化等。另外也提供酰胺成环,包括头尾环肽,侧连环肽等。也可以提供一些酯键,硫酯键等环肽的合成。

点击化学的代表反应为铜催化的叠氮-炔基Husigen环加成反应(Copper-Catalyzed Azide–Alkyne Cycloaddition)。点击化学的概念对化学合成领域有很大的贡献,在药物开发和生物医用材料等的诸多领域中,它已经成为目前最为有用和吸引人的合成理念之一。具体在多肽中应用主要是在多肽中带有叠氮基或炔基官能团,常用的化合物有以下几种可以选择。 Fmoc - 4 – azidophenylalanine Fmoc - Phe(N3) - OH; Fmoc – Azidohomoalanine Fmoc - D – propargylglycine Fmoc - D - Pra - OH Fmoc - L - propargylglycine Fmoc - L - Pra - OH Fmoc - Lys(N3) – OH Fmoc - azidolysine; Fmoc - lys(azide); Azidoacetic acid 6-Azidohexanoic acid Propiolic acid

主要有Lys(Me), Lys(Me2), Lys(Me3) 以及Orn(Me), Orn(Me2), Orn(Me3),Arg(Me), Arg(Me2,Symetrical) , Arg(Me2,ASymetrical)

多肽C端硫酯修饰后可以应用于Native chemical ligation反应,与另外一条N端为半胱氨酸的多肽在中性条件下发生化学选择之硫酯转移反应(chemoselective transthioesterification),重排成酰胺键,实现二条多肽间的连接。可以应用于长肽通过片段进行连接。

经常有一些多肽需要与一些药物或者特定功能的化合物进行连接,或者要把多肽连接到某些载体上去,需要化学键进行结合,一般多肽具有氨基或羧酸官能团可以考虑下相应的羧酸或氨基进行缩合,另外一种选择是通过巯基(thiol)与马来酰亚胺(Maleimide)在PH 8的环境下连接。多肽中可以同过带有Cys或者Maleimide官能团进行修饰。Maleimide修饰通常可以选择化合物3-Maleimidopropionic Acid (CAS 7423-55-4)实现。

一条多肽产品中除了多肽本身还包括生产过程中带入的水份及有机盐分等杂质,多肽纯度仅指多肽本身所含肽产品的含量及杂质的含量,不包括水份等杂质;而多肽含量则是指目标多肽在产品中的净含量,一般以N元素分析或氨基酸分子的方法来检测;因此一条多肽即使纯度达到99%,因为产品中还包含水份及有机盐分等,它的含量可能也只有70-80%。

多数多肽都可以用超纯水溶解,对于一些难溶的多肽,先要分析其氨基酸序列,对于酸性多肽,可先以小量碱性(如0.1%氨水)溶液溶解,然后稀释至所需浓度,对于碱性多肽,可先以小量酸性(如醋酸,三氟乙酸)溶液溶解,然后稀释至所需浓度,对于疏水性多肽,可用强极性有机溶剂溶解,如DMF,甲醇,丙醇,异丙醇,DMSO等。

抗原多肽选择的基本原则有(1)尽可能是在蛋白表面;(2)保证该段序列不形成α-helix; (3)N,C端的肽段比中间的肽段更好;(4)避免蛋白内部重复或接近重复段的序列;(5)避免同源性太强的肽段;(6)交联可以交联在N、C两端,选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端;(7)序列中不能有太多的Pro,但有一两个Pro有好处,可以使肽链结构相对稳定一些,对产生特异性抗体有益。

为了使生产抗体获得最佳效果,仔细地设计抗原多肽是很有必要的,设计应满足一个基本条件:在免疫过程中,该抗原既不会产生过强的免疫反应,同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。